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细胞鉴定、稳转和耐药性

细胞鉴定

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜或流式细胞仪下呈现一种特异性荧光反应。

服务内容

(1) 细胞免疫荧光染色鉴定;

(2) 细胞免疫化学染色鉴定;

(3) 细胞染料染色鉴定;

(4) 细胞流式细胞仪鉴定。

                

稳转细胞系

稳定转染就是转染的质粒DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒,根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代,从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。

筛选稳定细胞系有两种方法:

(1) 转染质粒后,单克隆方法筛选稳定细胞系;

(2) 慢病毒感染筛选稳定细胞系。慢病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效,是目前主流的稳定细胞系筛选方法。


一般实验流程

(1) 筛选浓度测定:以10~14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度

(2) 细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到60%~80%覆盖

(3) 细胞转染(病毒、脂质体、电穿孔、FuGENE 6)

(4) 利用质粒上含有的抗性选择进行筛选

(5) 鉴定筛选结果


客户提供

(1) 构建好的外源基因载体

(2) 待转染的细胞系(1×106个细胞,可传代,倍增时间小于48小时)以及BETVICTOR条件的说明

(3) 若需要检测靶基因的表达变化,请提供相应抗体


耐药细胞株构建

实验内容与方法:

(1) 体外低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击方法诱导细胞的耐药性

(2) MTT法测定药物对亲本细胞和耐药细胞的IC50,计算耐药指数

实验信息(客户提供):

(1) 生长状况良好的宿主细胞株,并提供细胞特性,培养条件及相关注意事项

(2) 诱导剂

服务周期:

6个月

结果提交:

提交实验报告书(耐药指数、实验试剂与设备、实验过程、结果分析、原始数据、细胞图片等)、耐药细胞株、亲本细胞株。


订购信息
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